Część 4. Wpływ bardzo niskiej częstotliwości pól elektromagnetycznych na hamowanie komórek nowotworowych i możliwy mechanizm

info-1437-249

trypsyna (optymalny czas trawienia różniło się w zależności od komórki: 293 T, 1 min; Hepg2, 1 min; A549, 2 min) . Trawienie

zakończono w pożywce i wszystkie komórki dodano do rurki wirówki ., a otwór oczyszczono za pomocą

Normalna sól fizjologiczna wiele razy i dodana do rurki wirówki . W tej chwili rurka wirówki zawierała wszystkie komórki .

Czy komórki pozostawiono w otworze pod mikroskopem .

Zawieszone komórki: Wszystkie zawiesiny komórkowe umieszczono w probówki wirówkowej . Otwory przemyto normalnym

sól fizjologiczna kilka razy i umieszczona w probówki . w tym czasie rurka wirówki zawierała wszystkie komórki .

Pory zaobserwowano dla pozostałości komórkowej pod mikroskopem .

Liczenie: Komórki odwirowano, ponownie zawieszono w odpowiedniej pożywce, rozcieńczono częściowo i wybarwiono

Z Trypan Blue . Następnie 10 µl jego wstrzyknięto przez szkło pokrywy .

Wzór obliczeń: liczba komórek/4 × Współczynnik rozcieńczenia × rozcieńczenie × 104 .

Komórki w każdej grupie zliczono trzykrotnie dla łącznie trzech grup .

Wykrywanie wartości pH .Fluores fluorescencyjny dla błony.

Cent sonda 2 ', 7'-bis-(2- carboxyetyl) -5- carboxyfluorescein (Beyotime Biotechnology, Chiny) zastosowano do oceny

Wartość pH wewnątrzkomórkowa . Komórki hodowano w 96- studzienki i wystawione na 5- MT, 20- pola magnetyczna Hz Hz magnetyczne

Przez 2 godziny w pierwszych 2 dniach . w dniu 3 komórki ponownie zawieszono w 100 µl 25 µm BCECF AM w 0,04% Pluronic

F -127 Rozwiązanie robocze i inkubowane w inkubatorze CO2 przy 37 ± 0 . 18 stopni przez 1 godzinę. Supernatant został zastąpiony

z buforem HHBS (AAT Bioquest, USA) i komórki poddawano ekspozycji pola magnetycznego przez 2 H .

Supernatant następnie zastąpiono PBS, a wartości pH określono za pomocą cytometrii przepływowej FITC (FACS

Calibur, bd) .

Wewnątrzkomórkowe testy stężenia wapnia .Kalbryt fluorescencyjny z membraną

520 AM (AAT Bioquest) zastosowano do oceny wewnątrzkomórkowego stężenia wapnia . Komórki hodowano w

96- Dobrze płyta i wystawione na 5- MT, 20- HZ Pole magnetyczne przez 2 godziny w pierwszych 2 dniach . w dniu 3 komórki były komórki, komórki były

ponownie zawieszone w 100 µl 5 µm calbryte 520 AM w 0,04% plurronic F -127 i inkubowane w a

Inkubator CO2 przy 37 ± 0 . 18 stopni przez 1 godzinę. Supernatant zastąpiono buforem HHBS (AAT Bioquest) i

Komórki były narażone na pole magnetyczne przez 2 godziny . Następnie supernatant zastąpiono PBS i wewnątrzcelowy

Wartości stężenia wapnia określono przy użyciu cytometrii przepływowej FITC (FACS calibur) .

Określenie potencjału błony komórek .Potencjał błony określono za pomocą

Wrażliwy na potencjalny bar barwnik fluorescencyjny bis- (1, 3- kwas dibutylbarbiturowy) trimetyny oksonol (DiBAC4) (3) (bio AAT Bio

Quest) . Fluorescencyjny barwnik dibac4 (3) przeniknął do depolaryzowanych o wysokim potencjale membranowym,

Prowadzenie do wzrostu intensywności fluorescencji wewnątrzkomórkowej . DIBAC4 (3) zwolniono z Hyperpo

zarykowane komórki i wewnątrzkomórkowa intensywność fluorescencji zmniejszyła się . Komórki hodowano w płytkach studzienkowych 96-

narażone na 5- MT, 20- HZ Pole magnetyczne przez 2 godziny w ciągu pierwszych 2 dni . Komórki hodowano w 100 µl HHBS .

W dniu 3 komórki ponownie zawieszono w 100 µl 10 µM DIBAC4 (3) AM w 0,04% plurronic F -127 Solus

i inkubowane w inkubatorze CO2 przy 37 ± 0 . 18 stopni przez 1 godzinę. Supernatant zastąpiono buforem HHBS

(AAT Bioquest), a komórki były narażone na pole magnetyczne przez 2 H . Następnie supernatant został zastąpiony

PBS i potencjały błony komórkowej określono za pomocą cytometrii przepływowej FITC (FACS calibur) .

Wykrywanie jonów sodu .Komórki hodowano w 96- studzienki i wystawiono na 5- MT, 20- Hz magnetyczny

Pole przez 2 godziny w pierwszych 2 dniach . W dniu 3 pożywkę zastąpiono 100 µl HHBS i 100 µl 10 µm

SBFI AM (Cayman Chemical) w rozwiązaniu 0 . 04% Pluronic f -127. Supernatant został zastąpiony

Bufor HHBS (AAT Bioquest) po inkubacji 4- w inkubatorze CO2 przy 37 ± 0,18 stopnia, a komórki odsłonięto

do pola magnetycznego przez 2 H . Jon sodu określono przy wzbudzeniu 330/80 i emisji 528/20 za pomocą a

Microplate Tester .

Wykrywanie jonów potasowych .Komórki hodowano w 96- studzienki i wystawiono na 5- mt, 20- hz mag.

Pole netyczne przez 2 godziny w pierwsze 2 dni . W dniu 3 pożywkę zastąpiono 100 µl HHBS i 100 µl

10 µM PBFI AM (Cayman Chemical) w 0 . 04% Pluronic F -127 Rozwiązanie robocze. Po inkubacji 4- w CO2

inkubator przy 37 ± 0,18 stopnia supernatant zastąpiono buforem HHBS (AAT Bioquest), a komórki były

narażone na pole magnetyczne przez 2 godziny . Oznaczanie jonów potasowych przeprowadzono przy wzbudzeniu 330/80 i

Emisja 528/20 za pomocą testera mikropłytek .

Trypan Blue Farbowanie .293 T, Hepg2 i A549 w logarytmicznej fazie wzrostu Trawiono trypsyna

i zebrane . Komórki Raji zebrano bezpośrednio . Po odwirowaniu komórki zabarwiono ważnym

barwnik Trypan Blue . Żywe komórki zliczono pod odwróconym mikroskopem świetlnym (Carl Zeiss, Niemcy) . Komórka

Określono wskaźniki hamowania wzrostu i wykreślono reprezentatywne krzywe . szybkość hamowania (%)=(num

Ber komórek w grupie kontrolnej - liczba komórek w grupie pola magnetycznego) / Liczba komórek w kontroli

grupa × 100%.

Analiza statystyczna .Wszystkie dane wyrażono jako średnią ± błąd standardowy średniej i jednokierunkowa analiza

Do porównania wielu grup . zastosowano wariancję Test t -Studenta, aby porównać leczone

versus nietraktowane grupy . wartość AP<0.05 indicated a statistically significant difference. The confirmatory results

na str<0.05 were obtained from repeating studies at least two times. Each set of experiments had three parallel

Próbki i każdy eksperyment powtórzono trzy razy .

Dostępność danych

Wszystkie dane są przedstawione w tym opublikowanym artykule i pliku uzupełniającym .

Odniesienia

1. Zhang, x . i in. . pola magnetyczne przy bardzo niskiej częstotliwości (50 Hz, 0,8 mt) mogą wywoływać pobieranie wewnątrzkomórkowych poziomów wapnia

W osteoblasts . biochem . biophys . res . commun . 396 (3), 662–666 (2010) .}

2. Li, J . i in. . Naturalne statyczne apoptozę indukowaną polem magnetycznym w komórce raka wątroby . biol . Med . 33 (1), 47–50 (2014) .}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}

Koh, E et al. A 4 Hz sinusoidalny pole magnetyczne powoduje apoptozę komórek rakowych prostaty poprzez reaktywne gatunki tlenu.

J . radiacie . biol . 84 (11), 945–955 (2008) .

4. Cameron, i . L . i in. . terapeutyczne pole elektromagnetyczne (TEMF) i napromieniowanie gamma na wzrost raka ludzkiego raka piersi, Wzrost ksenoprzeszczepu ludzkiego raka piersi,

angiogeneza i przerzuty . komórka rakowa int . 5, 23 (2005) .

5. de Seze, r . i in. . efekty 100 mt pola magnetycznego zmieniające się w czasie na wzrost nowotworów u myszy . bioelektromagnetyka 21 (2), 107–111

(2000).

6. novikov, v . v ., novikov, g . v . i fesenko, e . e .} efekt słabych statycznych statycznych i wyjątkowo niskiej przepływu maniaku

Pola na temat wzrostu guza u myszy zaszczepionych rakiem wodobrzusza Ehrlich . bioelectromagnetics 30 (5), 343–351 (2009) .

7. tatarov, i . i in. . Wpływ pól magnetycznych na wzrost guza i żywotność . comp . med . 61 (4), 339–345 (2011) .}}}}}}}

8. tofani, s . i in. . Zwiększone przeżycie myszy, hamowanie wzrostu nowotworu i zmniejszone immunoreaktywne p53 po ekspozycji na magnetyczne

Fields . bioelectromagnetics 23 (3), 230–238 (2002) .

9. tofani, s . i in. . pola magnetyczne i elf indukują hamowanie wzrostu guza i apoptozę . bioeLectRomagnetics https: // doi. org/{3}}

10 . 1002/BEM .69 (2001).

10. Williams, C . d . i in. . Efekt elektromagnetyczny na angiogenezę i wzrost guza . antyCancer Res . 21 (6A), 3887– 3887–

3891 (2001).

11. Yamaguchi, S . i in. . Wpływ pulsacyjnej stymulacji magnetycznej na rozwój guza i funkcje odpornościowe u myszy . bioelektromag

Netics 27 (1), 64–72 (2006) .

12. Berg, H . i in. . Wpływ pola bioelektromagnetycznego na komórki rakowe i guzy myszy . elektromagn biol . Med . 29 (4), 132–143 (2010).}}}}}}}}}}}}}

13. liang, y . i in. . wzmocniona siła daunorubicyny przeciwko wieloportalnym odpornym na Subline Kb-chr -8-5-11 przez pulsowane pole magnetyczne .}

Anticancer Res . 17 (3c), 2083–2088 (1997) .

14. omote, y . i in. . leczenie guzów eksperymentalnych za pomocą kombinacji pulsującego pola magnetycznego i leku przeciwwnicia . jpn . j .

Cancer Res . 81 (9), 956–961 (1990) .

15. Xu, L . i in. . synergistyczne hamujące działanie statycznego pola magnetycznego i przeciwnowotworowego na HEPA 1-6 komórki .} sheng wu gong cheng xue xue xue xue

BAO 31 (9), 1363–1374 (2015) .

16. Gellrich, D ., Becker, S . i Strieth, S . statyczne pola magnetyczne zwiększają wyciek mikrofonów nowotworowych i poprawić skuteczność przeciwtumuralną

W połączeniu z paklitaksel . Cancer Lett . 343, 107–114 (2014) .

17. el-Bialy, n . s . i rageh, m . m . Niezwykle niskie pole magnetyczne zwiększa skuteczność terapeutyczną niskiej dawki cisplatyny w cisplatynie w niskiej dawce.

Leczenie raka ehrlich . biomed . res . int . 2013, 189352 (2013) .

18. Gellrich, D . i in. . modulacja ekspozycji na statyczne pole magnetyczne wpływa na ukierunkowaną terapię guzów stałych in vivo . przeciwcancer Res .

38, 4549–4555 (2018).

19. crocetti, s . i in. . pulsowane pulsowane pulę elektromagnetyczne selektywnie upośledzają żywotność komórek raka piersi . PLOS

One 8 (9), E72944 (2013) .

20. Raylman, r . r ., Clavo, A . c . i Wahl, r . L .} ekspozycja na silne statyczne pole magnetyczne Silds of Human Rake Cells in Vitro.}}}}

BioElectromagnetics 17 (5), 358–363 (1996) .

21. Wang, T . i in. . Zaangażowanie ekspresji środkowej w hamujące działanie pól magnetycznych o niskiej częstotliwości na komórki rakowe . bio bio

elektromagnetics 32 (6), 443–452 (2011) .

22. Buckner, C . A . i in. . hamowanie wzrostu komórek rakowych przez narażenie na określone zmienne pola elektromagnetyczne obejmuje typ T typu.

Kanały wapniowe . PLOS ONE 10 (4), e0124136 (2015) .

23. Wang, M . H . i in. . Wpływ parametrów pola elektromagnetycznego o wyjątkowo niskiej częstotliwości na proliferację raka ludzkiego piersi .

Elektromagn . biol . med . 40 (3), 384–392 (2021) .

24. Kim, S . H . i in. . test bioelektromag Toksyczność w szczurach BioElecromag w Sprague - Dawley narażone na 90 dni . bioelektromag

Netics 27 (2), 105–111 (2006) .

25. Ashdown, C . p . i in. . pulsowane pól magnetyczna o niskiej częstotliwości indukuj zakłócenie błony nowotworowej i zmieniona żywotność komórek . biofys .}}}

J. 118, 1552–1563 (2020).

26. Watson, J . M ., Parrish, E . A . i rinehart, c . a . selektywne rozmieszczenie wzrostu komórek raka ginekologicznego in vitro przez elektromagnetykę

Fields . gynecol . oncol . 71 (1), 64–71 (1998) .

27. Zhou, y . i in. . transdukcja sygnału . potencjał membranowy moduluje dynamikę fosfolipidów plazmatyczną i sygnalizację k-ras .

Science 349, 873–876 (2015) .

28. Berzingi, S ., Newman, M . i yu, H . G . Zmiana bioelektryczności w hamowaniu ludzkich komórek raka piersi . Cancer Cell Int . 16, 72

(2016).

29. leslie, t . k . i in. . sodium homeostasis w mikrośrodowisku nowotworów . biochim . biophys . acta rev {. rak 1872 (2), 188304

(2019).

30. Wang, x . x . i in. . Analiza ekspresji metylacji DNA na 12 solidnych nowotworach ujawnia hipermetylację w

Ścieżka sygnalizacji wapniowej . onCotarget 8 (7), 11868–11876 (2017) .

Podziękowanie

Dziękujemy profesorowi Peterowi K . Prawo z Cell Therapy Institute, Wuhan, Chiny, za pomoc techniczną .

Wkład autora

J . S . zaprojektował badanie, przeprowadził większość eksperymentów, przeanalizowano dane i napisał manuskrypt . H . w .

Doradzono projektowanie eksperymentu i pomogło w eksperymentach . y . J ., x . J ., y . c i y . y . {{{{{{{{.}

i przeprowadzone eksperymenty . w . y . J . skomentowane na manuskrypcie . Z . M, K . C, X. D {{{{{. Z . l . c i j . m . w Prefekta

Połączone w produkcji i pomiaru instrumentów pola magnetycznego . g . H . y . zaprojektowane i nadzorowane przez

Studiuj, zinterpretował dane i napisał manuskrypt .

Finansowanie

Specjalny fundusz zapobiegania rakowi i leczeniu szanghajskiego rozwoju nauki i technologii Foun

dation (numer dotacji CT20200517A) .

Konkurencyjne zainteresowania

Autorzy nie deklarują żadnych konkurencyjnych interesów .

Dodatkowe informacje

Informacje uzupełniająceWersja online zawiera materiały dodatkowe dostępne na stronie https: // doi . org/

10.1038/s41598-023-34144-5.

Korespondencjai prośby o materiały powinny być adresowane do g . y .

Informacje o przedrukach i uprawnieniajest dostępny na stronie www . natura . com/reprints .

Notatka wydawcySpringer Nature pozostaje neutralne w odniesieniu do roszczeń jurysdykcyjnych w opublikowanych mapach i

przynależności do instytucjonalnych .

Otwarty dostępTen artykuł jest licencjonowany w ramach Creative Commons Actiftion 4.0 International

Licencja, która zezwala na używanie, udostępnianie, adaptacja, dystrybucja i reprodukcja w dowolnym medium lub

Format, o ile przypisasz odpowiednie uznanie oryginalnej i źródłowi, podaj link do

Licencja Creative Commons i wskazuj, czy wprowadzono zmiany . obrazy lub inne materiały trzeciej w tym

Artykuł jest zawarty w licencji Creative Commons artykułu, chyba że wskazano inaczej w linii kredytowej dla

Materiał . Jeśli materiał nie jest zawarty w licencji Creative Commons artykułu, a twoje zamierzone użycie nie jest

dozwolone przez ustawowe regulacje lub przekracza dozwolone użycie, musisz uzyskać zgodę bezpośrednio z

Posiadacz praw autorskich . Aby wyświetlić kopię tej licencji, odwiedź http: // CreativeCommons . org/licencess/by/4 . 0/.